Главная » Статьи » Мои статьи

Приготовление центрифугатов и фильтратов.

Приготовление центрифугатов и фильтратов.

Мышей с лейкозами (использовали только животных, у которых наряду с лим-фолейкозами развивались лимфосаркомы вилочковой железы), индуцированными рентгеновыми лучами, забивали эфиром, стерильно брали лимфосаркому вилочковой железы, лимфатические узлы, печень, селезенку. Исследуемую ткань стерильно растирали на льду в ступке в течение 10—15 минут в стерильном охлажденном физиологическом растворе (рН =7,0—7,3) в отношении 1 : 5. Суспензию центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, затем надосадочную жидкость еще раз центрифугировали при 6000 об/мин в течение 15 минут, после чего проводили третье центрифугирование надосадочной жидкости при 8000—9000 об/мин в течение 10 минут (отсутствие целых клеток контролировали под микроскопом). Надосадочную жидкость, к которой добавляли 200 ЕД пенициллина на 1 мл, использовали для внутрибрюшинных введений (по 0,1—0,4 мл) мышатам C57BL на 1—6-е сутки после рождения. В нескольких экспериментах надосадочную жидкость фильтровали под отрицательным давлением (масляный насос) через фильтр Зейтца, расщепленный надвое. Стерильность вводимого материала проверяли посевами на мясо-пептонный бульон. Контролем служили те же самые центрифугаты и фильтраты, прогретые при 80° в течение 30 минут, а также водно-солевые бесклеточные экстракты, приготовленные описанным выше способом, из нормальных тканей мышей C57BL.

В ряде экспериментов подопытных животных месячного возраста с целью ослабления защитных сил подвергали воздействию рентгеновых лучей (однократное облучение 100 г при описанных выше условиях) и обработке кортизоном. Кортизон вводили под кожу 2 раза по 2 мг с недельным интервалом.

Диагноз лейкозов ставили на основании ясно выраженной макроскопической картины (опухоль вилочковой железы, значительное увеличение лимфатических узлов, печени, селезенки) в сочетании с цитологическим и гистологическим методами исследования. Отпечатки внутренних органов (селезенка, печень, костный мозг) окрашивали по методу Паппенгейма, а гистологические срезы толщиной от 5 до Юр — гематоксилин-эозином.

По материалам сайта http://medicadverts.ru/

Категория: Мои статьи | Добавил: strua (25.10.2011)
Просмотров: 620 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]